How CUT&RUN Profiles Chromatin | Cell Signaling Technology

✂️➕🏃🏽♀️ℹ️ Узнайте больше о преимуществах анализа CUT&RUN: https://cst-science.com/cutandrun CUT&RUN — это альтернатива иммунопреципитации хроматина с использованием небольшого количества клеток. Эта анимация описывает, как выделяются специфические белково-ДНК комплексы для картирования хроматина. Транскрипт: Динамические взаимодействия между белками и ДНК определяют многие биологические процессы, включая экспрессию генов, которые способствуют дифференцировке клеток, развитию и прогрессированию заболеваний. Картирование мест и времени этих событий связывания белков и ДНК имеет важное значение для механистических исследований эпигенетики как в нормальном развитии, так и при заболеваниях. Для получения таких данных ученые обычно используют иммунопреципитацию хроматина. Это включает в себя трехдневный протокол, включающий этапы сшивания и фрагментации хроматина, иммунопреципитации, выделения и элюции комплексов, а также очистки ДНК. Теперь доступен новый подход, известный как CUT&RUN. Как работает CUT&RUN и чем он отличается от ChIP? Для подготовки исходного материала для CUT&RUN клетки собирают, связывают с магнитными шариками для упрощения обработки и минимизации потерь образца, и пермеабилизируют дигитонином. Фиксатор для сшивания не требуется, поэтому хроматин сохраняется в своем нативном состоянии. Затем к пермеабилизированным клеткам добавляют антитело к интересующему белку. Мишенью может быть фактор транскрипции, кофактор или модификация гистона. Далее добавляют фермент микрококковую нуклеазу протеин А-протеин G, которая рекрутируется к хроматину за счет взаимодействия антитела с белком А или белком G. При добавлении кальция фермент разрезает ДНК в месте взаимодействия белка и ДНК. Такая конструкция обеспечивает точное нацеливание и эффективный контроль активности нуклеазы. Комплекс, содержащий переваренную ДНК, свободно диффундирует в супернатант, в то время как оставшийся хроматин задерживается в ядрах, что упрощает последующую очистку ДНК. По сравнению с ChIP, метод CUT&RUN обеспечивает более низкий фоновый уровень, используя меньшее количество исходного материала и требуя меньшего количества прочтений секвенирования. Метод CUT&RUN позволяет получить ДНК из клеток всего за один-два дня. Включение контрольной ДНК обеспечивает воспроизводимость эксперимента. Реагенты и наборы CUT&RUN от Cell Signaling Technology® предлагают гибкие варианты, соответствующие вашим потребностям. Для полного решения выберите набор CUT&RUN Assay Kit, который включает необходимые буферы, реагенты и контроли, а также подробный протокол. Просто добавьте проверенное первичное антитело против интересующего вас белка. Или вы можете выбрать набор ферментов и контрольной ДНК, или отдельные реагенты, необходимые для завершения эксперимента. Чтобы найти наборы, реагенты и антитела для ваших экспериментов CUT&RUN, перейдите по этой ссылке: https://cst-science.com/cutandrun О нас: Cell Signaling Technology (CST) — это компания, работающая в сфере биологических наук, основанная, принадлежащая и управляемая активными учеными-исследователями, придерживающимися высочайших стандартов качества продукции и услуг, технологических инноваций и научной строгости. Мы — компания, состоящая из заботливых людей, движимых стремлением содействовать развитию качественной науки — компания, приверженная принципам добросовестного отношения к нашим клиентам, нашим сообществам и нашей планете. https://cellsignal.com/about Все товарные знаки являются собственностью их соответствующих владельцев. Для получения самой актуальной информации о товарных знаках посетите https://cellsignal.com/trademarks