Экстракция ДНК из фекалий || исследование, эксперимент || Выделение ДНК из кала мышей.

Здравствуйте, студенты-исследователи. Я провела эксперимент по выделению ДНК из фекальных клеток. Эти шаги описаны здесь вместе с видео эксперимента. Надеюсь, это видео будет полезно студентам-исследователям. 🦭🤍........... Протокол: Выделение ДНК из кала для обнаружения патогенов Перед началом:🫶 ✅ Подготовьте следующее: • Термомиксер или водяная баня при температуре 70°C • Этанол (96–100%), добавленный к буферам AW1 и AW2 💪🍃Пошаговая процедура 1️Подготовка образца: • Взвесьте менее 23 мг образца кала в микроцентрифужной пробирке объемом 2 мл. 2️Лизис и гомогенизация: • Добавьте 1 мл буфера InhibitEX ко всем образцам. • Непрерывно перемешивайте на вортексе до полного смешивания. 3. Термическая обработка: • Инкубировать при 70°C в течение 5 мин (или при 95°C для труднолизируемых бактерий). • Встряхивать на вортексе в течение 15 сек для обеспечения полного лизиса. 4. Центрифугирование: • Центрифугировать на полной скорости (20 000 об/мин) в течение 1 мин для осаждения остатков кала. • Перенести 200 мкл прозрачного супернатанта в новую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл (избегать твердых частиц). ☻В первую пробирку добавить протеиназу К, затем добавить 200 мкл прозрачного супернатанта. 5. Переваривание белков: • Добавить 15 мкл протеиназы К к супернатанту и перемешать пипеткой и ботаксером. • Добавить 200 мкл буфера AL, затем перемешать на вортексе в течение 15 сек. 6. Инкубация: • Нагревайте при 70°C в течение 10 мин для расщепления белков. 7. Осаждение ДНК: • Добавьте 200 мкл этанола (96–100%), затем перемешайте на вортексе. 8. Связывание ДНК: • Перенесите 600 мкл смеси на центрифужную колонку QIAamp в пробирку объемом 2 мл. • Центрифугируйте на полной скорости в течение 1 мин и удалите прошедший через колонку раствор. 9. Этапы промывки: • Добавьте 500 мкл буфера AW1 → Центрифугируйте в течение 1 мин → Удалите прошедший через колонку раствор. • Добавьте 500 мкл буфера AW2 → Центрифугируйте в течение 3 мин → Удалите прошедший через колонку раствор. • Финальное центрифугирование: снова центрифугируйте в течение 3 мин для удаления остатков промывочного буфера. 10. Элюция: • Перенесите центрифужную колонку в новую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл. • Добавьте 200 мкл буфера ATE непосредственно на мембрану. • Инкубируйте в течение 1 минуты, затем центрифугируйте в течение 1 минуты для элюирования ДНК. 11. Измерьте концентрацию ДНК с помощью спектрофотометра NanoDrop. #pakistani #punjabi #southkorea #students #busan #koreanscholarship #master #groceryshopping #studentlife #dnaextraction #Fecalcell #dna #southkorea #research #science #researchinstitute #laboratory #experiment